氨苄青霉素溶液(100 mg/ml)
● 产品包装：
|
产品编号
|
产品名称
|
产品包装
|
说明书
|
|
AA0120S-02
|
氨苄青霉素溶液(100mg/ml)
|
10×1 ml
|
1份
|
● 产品简介：
氨苄青霉素(Ampicillin, Amp)又称安比西林、氨苄西林，是一种β-内酰胺类抗生素,干扰肽聚糖的交联从而抑制细菌细胞壁的合成。氨苄青霉素时常被用于分子生物学实验研究中，如用于配制含氨苄青霉素的LB培养基或LB平板等。氨苄青霉素溶液已经0.22
μm过滤除菌，可以直接添加到培养基中。一般推荐工作浓度为50～100
μg/ml。
本氨苄青霉素溶液已经优化溶解液，可以保持溶液在-20℃下基本不结冰，方便使用的同时降低了反复冻融对抗性的影响。
● 贮存、效期及运输：
-20℃保存；有效期6个月；湿冰运输。
● 使用方法：
1. 取出-20℃保存的氨苄青霉素溶液，常温彻底溶化，完全混匀。
注：溶液在-20℃下基本为流动性溶液，如有冰晶形成，常温彻底溶化后使用。
2.一般Amp在LB中终浓度为50～100
μg/ml。可以大体按照1/1000 LB体积加入100 mg/ml Amp溶液，如100 ml LB中加入50-100 μl Amp 100 mg/ml。
注：氨苄青霉素对高温敏感，要等待LB琼脂温度低于55℃后再加入氨苄溶液。
3. 在所有的细菌筛选抗生素中，氨苄青霉素的稳定性最为不佳，参照下表确定使用的效期：
|
类型
|
贮存温度
|
抗性维持时间
|
备注
|
|
LB氨苄平板
|
4-8℃
|
＜2周
|
平板要Parafilm封口，避免平板水分蒸发干裂
|
|
氨苄溶液（100mg/ml）
|
-20℃
|
6个月
|
尽量降低溶液反复冻融次数
|
|
氨苄溶液（100mg/ml）
|
4-8℃
|
＜2周
|
尽量避免溶液贮存在4-8℃
|
|
LB液体摇菌
|
37℃培养
|
＜2天
|
摇菌时，OD值控制在3以内
|
● 注意事项：
1. 卫星菌落：LB氨苄琼脂平板培养时间过长时，会发现一个大菌落的周围会出现一些小的菌落，这些小的菌落称为卫星菌落（satellite
colony）。原因：氨苄青霉素可以被β-内酰胺酶（β-lactamase）水解。平板上的细菌产生的β-内酰胺酶分泌到细胞外，随着细菌的生长，培养基中的β-内酰胺酶会不断增加，这时培养基内氨苄青霉素会被降解，因此没有氨苄抗性质粒的小菌群则环绕大菌落生长，产生卫星菌落。卫星菌落没有氨苄抗性，挑取单菌落时，不要挑取卫星菌落培养。
2. 质粒丢失：氨苄抗性细菌在传代的时候，会出现质粒丢失，传代次数越多，质粒丢失的可能性越大。对于其他抗生素如氯霉素，细菌如果丢失了部分带抗性的质粒，该菌在含有氯霉素的培养基中是不会生长的。但是对于氨苄则不然，在液体培养液中，培养时间过长的培养基中氨苄的浓度会降低，丢失了一部分质粒的细菌也可以在其中生长。因此对于使用氨苄作为抗性标记的克隆，每隔一段时间需要检查细菌质粒丢失情况。比较直观的办法就是通过SDS-PAGE，如果发现蛋白质的表达水平降低了，很大可能是因为质粒丢失了，此时需要重新转化重组载体。
3. 不要使用配制时间过长或超过效期的氨苄溶液。氨苄存储时间过长或者保存不当，很有可能发生降解。
4. 液体培养建议：在液体培养中，不要让细菌长到过饱和，在LB培养基中，OD600绝对不能超过3。如果是扩大培养，可以先把初始培养液内细菌沉淀，然后利用新鲜的培养液重悬，再进行下一步的培养，这样可以大大减少β-内酰胺酶在液体中的含量。