TBE-PAGE电泳可以选择PAGE电泳Marker 作为分子量标准。
DNA非变性PAGE电泳试剂盒（货号RTE4101）
DNA Native PAGE
Electrophoresis Kit
● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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保存条件
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AC2913-01
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30%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TB001
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5×TBE
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500 ml
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RT
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AP020P
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APS（干粉）
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5 ml
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RT（配制后-20℃贮存）
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TA0761-01
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TEMED
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0.5 ml
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4℃，避光
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DL070
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6×Native-PAGE DNA上样缓冲液
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1 ml
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4℃
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● 产品简介：
非变性 PAGE 电泳是研究DNA构象变化的常用手段，在非变性条件下DNA的泳动与电荷、片段大小、DNA结合的蛋白及折叠构象都有关系。非变性PAGE电泳是研究单链 PCR片段构象多态性（SSCP-PCR，single-strand conformation polymorphism-PCR）的重要研究手段。在SSCP测定中，双链DNA（dsDNA）变性为单链DNA（ssDNA），每一条单链DNA都基于他们的内部序列呈现不同的折叠构象，即使相同长度的单链DNA因其碱基顺序不同，甚至单个碱基的不同都会形成不同的构象。这些不同构象的ssDNA 在非变性PAGE中得到分离。另外，非变性PAGE还可以分离小片段的双链DNA，与琼脂糖电泳相比，对低于500bp的双链DNA片段有更优秀的分辨率。
本公司提供的DNA非变性PAGE电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制各种浓度的PAGE胶，使用方便。
本试剂盒大约可以配制20-45块常规大小（8×10cm）PAGE凝胶，具体数量根据凝胶厚度决定：0.75mm厚度凝胶可以配制45块胶，1mm厚度凝胶可以配制至少35块胶，1.5mm厚度凝胶可以配制至少20块胶。
● 贮存和效期：
本产品常温运输，按照标签温度贮存；有效期一年。
● 使用说明：
10% APS配制-5 ml：
将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
一、制备凝胶步骤：（以下步骤为制备8×10cm厚度1.0mm胶）
1.1 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
1.2按照表一将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；最后加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5
cm的水层，使凝胶表面保持平整。
1.4静置10-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合
表一 TBE-PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于厚度1.0 mm小板胶)
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各组份体积（ml）
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最佳DNA分离范围
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凝胶浓度
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灭菌水
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30%PAA（29：1）
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5×TBE
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10%APS
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TEMED
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70-450 bp
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6%
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3
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1.0
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1.0
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0.05
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0.005
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60-460 bp
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8%
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2.66
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1.34
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1.0
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0.05
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0.005
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50-300 bp
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10%
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2.33
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1.67
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1.0
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0.05
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0.005
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40-200 bp
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12%
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2
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2.0
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1.0
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0.05
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0.005
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25-150 bp
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15%
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1.5
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2.5
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1.0
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0.05
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0.005
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5-100 bp
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20%
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0.66
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3.34
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1.0
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0.05
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0.005
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注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
1.5去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
表二 TBE-PAGE 4%浓缩配方表 (总体积1.5 ml，适用于1.0mm厚度胶)
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各组份体积（ml）
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凝胶浓度
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灭菌水
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30%PAA（29：1）
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5×TBE
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10%APS
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TEMED
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4%
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1.0
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0.2
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0.3
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0.02
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0.002
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1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
1.7静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二、电泳：
2.1 1×TBE电泳液配制：取100ml 5×TBE，加蒸馏水400 ml，即配成500
ml 1×TBE。将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够1×TBE电泳液。 用1ml吸头冲洗加样孔1-2次。
2.2 取待测样品，加入相应体积6×Native PAGE DNA上样液，如5 μl样品加1 μl 上样液，短暂离
心后取5-10 μl上样。TBE-PAGE中判断双链DNA大小可以选择20bp
DNA ladder（货号：RTM441）作为DNA Marker。
2.3 连接电源线，打开电源开关。200 V稳压电泳。至二甲苯菁指示前沿到达凝胶三分之二位置时结束电泳。
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TBE-PAGE电泳
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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200
V
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20-25 mA/板胶
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10-15
mA/板胶
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70+min
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三、染色：
3.1 漂洗：玻璃板上拆下凝胶后，适量蒸馏水漂洗3-5分钟。
3.2 染色液配制：
TBE-PAGE胶可以使用EB或RealSafe类染料后染染色，以下程序用RealSafe Red核酸染料进行染色。即用型染色液配制：
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即用型RealSafe核酸染色液
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100 ml
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1×TBE
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100 ml
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RealSafe Red核酸染料
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20 μl
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3.3染色：
凝胶浸泡于即用型染色液中，常温避光摇床40-60rpm染色30 分钟。
五、常见问题：
1. 为何 SSCP-PCR带型有复合条带？
原因之一：可能是残留的 PCR 引物跟单链的 DNA 结合形成迁移率不同的条带。解决方法是稀释PCR或电泳前将PCR产物进行纯化。
原因之二：可能是PCR产物用量过高，彼此复性。解决办法是将PCR产物稀释后4-8倍后使用。
2. 如何提高电泳分辨率？
可以在配胶时加入甘油（终浓度为5%-10%），因为甘油是弱变性剂，能部分展开 DNA 折叠结构，增加表面积，增加电泳时位移差异。但加入甘油后粘性变大，电泳速度变慢，因此只适合常温电泳使用，不要4℃电泳。如果条件允许，最好同时做加甘油和不加甘油的电泳实验。
实验示例
使用RTE4101 DNA非变性PAGE电泳试剂盒产品发表部分文章列表：
1. [2022 IF=6] A novel ?uorescent sensor
based on aptamer recognition and DNA walker ampli?cation strategy and its
determination of 17b-estradiol.
Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang,
Meng Jiang, Hongying Zhang, LingMei Niu
Marker: RTE4101 DNA非变性PAGE电泳试剂盒
Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16
(2023) 105340.
Institution：School of Public Health, Hebei Medical
University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2023.105340