蛋白浓缩试剂盒（目录号：RTD9101）
● 试剂盒内容及保存：
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货号
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产品名称
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规格
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贮存
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RTD9101-01
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试剂A-沉淀溶液
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10 ml
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RT
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RTD9101-03
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试剂C-助沉剂
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5 ml
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RT
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RTD9101-04
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试剂D-中和液
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250 μl
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RT
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RTD9101-05
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1 M NaCl
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1 ml
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RT
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RTD9101-06
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1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（变性，还原）
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1 ml
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-20℃
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说明书
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1份
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● 储存条件和效期：
试剂盒常温运输；收到后，按照标签温度贮存；本试剂盒有效期1年。
● 产品简介：
试剂盒原理：在酸性条件下蛋白质形成不溶性盐，使蛋白质变性导致构象发生改变，蛋白暴露出较多的疏水性基团，蛋白发生聚集而沉淀。为了避免酸对后续电泳的影响，沉淀的蛋白要使用丙酮等洗涤液彻底清洗去除酸。浓缩后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western
blot 前的蛋白样品处理。
以每次浓缩800
μl蛋白样品计算，本试剂盒可以使用40-45次。
● 操作方法：
1. 准备1.5
ml干净的离心管，加入800 μl蛋白样品溶液。
可选：如果样品溶液中离子强度低于10
mM，补加8 μl的1M
NaCl溶液。低于800 μl的样品，加入8
μl 1 M NaCl，用水补齐体积至800 μl，使NaCl终浓度为10
mM。
2.
加入蛋白溶液1/10体积的试剂C-助沉剂-80
μl，混匀，常温静置15分钟。
注：加入试剂C后溶液变浑浊。
3. 加入步骤2溶液1/4体积的试剂A
-220 μl，涡旋震荡10-30秒，使之充分混匀。
4. 冰浴放置15分钟。
5. 4℃，12000
rpm（13000
g）离心10 分钟。
注：离心后白色蛋白沉淀弥散性可见于离心管管壁上。
6. 小心去掉上清液，保留沉淀。
注：请小心操作，可以用移液器辅助彻底吸弃上清。
7. 沉淀中加入600
μl预冷的丙酮（自备，试剂盒不提供），涡旋震荡10-30秒，彻底混匀。
注：丙酮有刺激性气味，请在通风橱内操作。
8. 冰浴15分钟。
9.
4℃，12000
rpm（13000
g) 离心10分钟；在通风橱中，倒掉上清。残留上清用10
μl吸头彻底吸弃，沉淀物通风晾干30-60秒。注：沉淀不能过分干燥，否则将导致蛋白不好溶解。
10.
蛋白溶解：
根据下表选择溶解缓冲液：
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下游实验
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溶解缓冲液
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备注
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SDS-PAGE电泳
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1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（变性，还原）
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试剂盒提供
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加入溶解缓冲液后，彻底溶解沉淀（37℃温浴处理），溶液正常颜色应为蓝色；如果溶液为淡绿色或黄色，加入1/10体积中和液D，使颜色变回蓝色。 95℃ 处理5分钟，电泳上样
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BCA蛋白定量
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40mM 碳酸钠pH11.25
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试剂盒不提供
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BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度
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等电聚焦IEF/2D电泳
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7M尿素，2M硫脲，40mM Tris，1%C7B2O或1% ASB-14 pH10.4
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试剂盒不提供
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酶切实验
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100 mM碳酸氢铵 pH8.5
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试剂盒不提供
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●实验示例：
