Tris-醋酸非变性PAGE电泳试剂盒(含预制胶)
货号
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名称
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规格
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RTD6156
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Tris-醋酸非变性PAGE电泳试剂盒(含预制胶)
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10次
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● 产品组成:
货号
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名称
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规格
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保存
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RTD6154-0308
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3-8%
RealPAGE Tris醋酸预制胶(U型板,通用型,12孔)
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10板/盒
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4℃
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TG170
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10×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(非变性电泳,溶液型)
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500
ml
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RT
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PL111-01
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5×非变性非还原蛋白上样缓冲液
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1 ml
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-20℃
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RTD6202
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FastBlue蛋白快速染色液
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500 ml
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RT
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TA5030P
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10×Tris-醋酸转膜缓冲液(湿转,粉末型)
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500
ml
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RT
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说明书
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一份
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-
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● 产品简介:
Tris-醋酸非变性PAGE凝胶电泳适合于分离高分子量蛋白,可以有效分离50-500 kD范围内蛋白;在电泳中,电泳缓冲体系和上样缓冲液中都不含有变性剂和还原剂,整个电泳过程都在完全非变性(非变性非还原)条件下进行,可以很好的保持蛋白的活性和聚体状态。
本公司提供的Tris-醋酸非变性PAGE电泳试剂盒包含预制胶、蛋白上样、蛋白电泳、染色及转膜所需要的全部试剂。试剂盒配套的预制胶为梯度凝胶,浓度为3-8%,厚度为1.1 mm,12齿,每个泳道可以上样最大30 μl样品。
本试剂盒用于蛋白非变性电泳,不能用于变性电泳,本试剂盒可以使用10次。
● 贮存及运输:
按照标签温度贮存;试剂盒常温运输。
● 使用说明:
一. 电泳:
注:伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向(如图)。
六一其他系列,君意东方JY-SCZ2/4,百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。
不兼容Thermol系列电泳槽。
1.2 准备1×电泳缓冲液:
总体积
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500
ml
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10×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(非变性电泳,溶液型)
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50 ml
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超纯水
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450 ml
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1.3准备上样样品:
注:表格以配制10 μl样品为例,其他体积按照比例调整。
组份
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总体积10 μl
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蛋白样品
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x μl
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5×非变性非还原蛋白上样缓冲液
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2 μl
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超纯水
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补至10 μl
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不要加热
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1.4电泳过程;
在电泳槽的内槽内加入1×电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔),轻轻的拨出梳子,用1ml吸头冲洗加样孔3次;随后在电泳槽外槽加入适量的1×电泳缓冲液。上样,电泳。
恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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150V
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40-55 mA/板胶
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25-40 mA/板胶
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60+min
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注:冰浴电泳(可选)
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二. 染色:
2.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,加入适量FastBlue蛋白染色液(以刚刚覆盖过胶面为适),摇床常温摇动,条带5-10分钟即可见(蛋白含量高于1
μg条带)。
2.2 摇床常温继续摇动15-30分钟至条带清晰可见。
2.3 加入适量蒸馏水脱色,期间更换1-2次蒸馏水,摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。
2.4
观察保存结果。
2.5
染色示例:
三. 转膜:
3.1 转印膜选择:
Tris-醋酸凝胶转膜可以使用NC膜和PVDF膜,需要选择0.45 μm孔径。PVDF膜使用前注意需要用甲醇润湿活化。
3.2 10×Tris-醋酸转膜缓冲液(溶液型)配制:
将10×Tris-醋酸转膜缓冲液(湿转,粉末型)粉末溶解于500 ml超纯水中,即配成500 ml 10×Tris-醋酸转膜缓冲液(溶液型),不要调节pH,pH~7.2。
3.3 准备1×转膜缓冲液:
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1×即用型转膜缓冲液 配制量 1升
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10×Tris-醋酸转膜缓冲液(溶液型)
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100
ml
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变性蛋白
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非变性蛋白
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<20 kD蛋白
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无水甲醇
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20%
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5-10%
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SDS
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0.01%
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0.01%
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20-80 kD蛋白
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无水甲醇
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10%
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0-5%
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SDS
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0.05%
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0.05%
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>80 kD蛋白
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无水甲醇
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10%(NC膜)
0-5%(PVDF膜)
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0%
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SDS
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0.1%
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0.1%
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超纯水
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定容至1升,不要调节pH,pH~7.2
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注:甲醇和SDS在转膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加结合在膜上,而SDS让蛋白更加离开膜。因此对大蛋白转膜来说,多加SDS,少加甲醇;而对小蛋白转膜,多加甲醇,少加SDS。
3.4 转膜条件:
以下转膜条件仅供参考,客户针对自己的目的蛋白大小,最好经过预实验后,确定最佳的转膜条件。
膜孔径
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蛋白大小
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稳流
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建议时间
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降温措施
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0.22 μm
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低于20 kD
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200 mA
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~30分钟
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不需要
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0.45 μm
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20-50 kD
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300 mA
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~45分钟
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需要
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0.45 μm
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50-200 kD
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350 mA
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~50分钟
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需要
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0.45 μm
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高于200
kD
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350 mA
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~2.5-4.5小时
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需要
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