SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
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货号
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名称
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规格
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RTD6123
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SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
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50次
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● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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保存条件
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AC2913-01
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30%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TS0588-01
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1M Tris-HCl pH8.8
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100 ml
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RT
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TS0568-15ml
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1M Tris-HCl pH6.8
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15 ml
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RT
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SD050-5ml
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10% SDS
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5 ml
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RT
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AP020P
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10% APS（干粉）
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5 ml
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RT 配制后-20℃贮存
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TA0761-01
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TEMED
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0.5 ml
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4℃，避光
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说明书
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一份
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● 产品简介：
本公司提供的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒包含凝胶制备所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(Native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制至少30-50块常规大小的PAGE胶。
● 贮存、运输及效期：
按照标签温度贮存；常温运输；有效期一年。
● 使用说明：
一 配制分离胶：
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一）。
表一 不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
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SDS-PAGE分离胶浓度
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最佳分离范围
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6%
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50-350kD
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8%
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35-300kD
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10%
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20-150kD
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12%
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15-100kD
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15%
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10-80kD
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配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
制备分离胶步骤：
1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2．根据表二，将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5
cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置15-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
表二 SDS-PAGE分离胶配方表
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组份
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不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml）
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6％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
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H2O
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2.05
|
4.1
|
6.15
|
8.2
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
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1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
8％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1.7
|
3.3
|
5
|
6.7
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
1.3
|
2.7
|
4
|
5.3
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
10％ 胶
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1.3
|
2.7
|
4
|
5.3
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
1.7
|
3.3
|
5
|
6.7
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
12％ 胶
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
2
|
4
|
6
|
8
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
15％ 胶
5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
0.5
|
1
|
1.5
|
2
|
|
1M Tris-HCl pH8.8
|
1.9
|
3.8
|
5.7
|
7.6
|
|
30％ PAA（29:1）
|
2.5
|
5
|
7.5
|
10
|
|
10% SDS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
TEMED
|
0.003
|
0.006
|
0.009
|
0.012
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10% SDS即可配制成非变性PAGE胶。
二 浓缩胶制备：
1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．按照表三将不同成分在一个小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%过硫酸铵，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
表三 SDS-PAGE浓缩胶(5%)配方表
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组份
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不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml）
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2
ml
|
4
ml
|
6
ml
|
10
ml
|
|
H2O
|
1.4
|
2.7
|
4.1
|
6.8
|
|
1M Tris-HCl pH6.8
|
0.25
|
0.5
|
0.75
|
1.25
|
|
30％ PAA（29:1）
|
0.33
|
0.67
|
1
|
1.7
|
|
10% SDS
|
0.02
|
0.04
|
0.06
|
0.1
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.006
|
0.01
|
|
10％ APS
|
0.02
|
0.04
|
0.06
|
0.1
|