Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒 说明书Ver
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货号
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名称
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规格
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RTD6122
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Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
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25次
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● 产品组成:
序号
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组分货号
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名称
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规格
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贮存
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1
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RTD6122-01
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2×浓缩胶缓冲液
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20
ml
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4℃
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2
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RTD6122-02
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2×分离胶缓冲液
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65
ml
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4℃
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3
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RTD6122-03
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2×浓缩胶聚合溶液
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20
ml
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4℃
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4
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RTD6122-04
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2×分离胶聚合溶液
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65
ml
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4℃
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5
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AS020P
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改良型促凝剂
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5
ml(干粉)
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常温
配制后-20℃
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7
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CB010P
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10×Tris-Tricine-
SDS缓冲液
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500
ml(干粉)
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常温
配制后4℃
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8
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TP050-01
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2×Tricine上样缓冲液(变性,还原)
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1
ml
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-20℃
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● 产品简介:
该产品含有多肽电泳全套试剂,可以用来检测1-20
kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少25块常规大小(8×10cm),厚度1 mm的PAGE胶。该产品具有以下特点:
1 适用范围广:制胶缓冲溶液中不含有SDS,适用于多肽的变性和非变性电泳。
2 分辨率高:凝胶缓冲液独特配方,可以有效分离1-5 kD多肽。
3 使用方便:配制凝胶时只需1:1混合浓缩胶或分离胶溶液,不用计算;红色浓缩胶,易于观察加样孔,上样方便。
4 绿色环保:不用单独添加有刺激性气味的催化剂如TEMED。
● 贮存、运输及效期:
按照标签温度贮存;常温运输;有效期一年。
● 使用说明:
一. 凝胶促凝剂配制:
改良型凝胶促凝剂为固体粉末,使用前加入5 ml双蒸水溶解即配制成10% 凝胶促凝剂溶液,将溶液分装后置于-20℃保存,通常一年内有效。该溶液在4℃条件下可以稳定保存两周。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20℃保存的10% 凝胶促凝剂溶液。
二. 制胶:
1. 配制分离胶:
1.1按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。 表1 (一块1 mm mini胶用量)*
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分离胶
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浓缩胶
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18%T
/5 ml
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4%T
/1.5 ml
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2×浓缩胶缓冲液
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/
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0.75 ml
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2×分离胶缓冲液
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2.5 ml
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/
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2×浓缩胶用聚合溶液
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/
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0.75 ml
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2×分离胶用聚合溶液
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2.5 ml
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/
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10%凝胶促凝剂溶液
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~50 μl
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~15 μl
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注: * 如非必须,不要使用厚度1.5 mm的凝胶,尽量使用厚度0.75 mm和1 mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
1.2 在玻璃板中迅速灌入适量分离胶溶液,使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5
cm即可。注:此溶液为过量,请勿全部注入。
1.3
然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-2 cm的无水乙醇层,使凝胶表面保持平整。
1.4 静置10-20分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据表1的标准条件调节促凝剂的加入量。分离胶25℃条件下,约20分钟可以聚合。
2. 配制浓缩胶:
去除覆盖在分离胶上的乙醇层,用滤纸将残留的乙醇吸去。
2.1 按照表一将不同成分加入到小烧杯中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
2.2 将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
2.3 静置30-40分钟待凝胶聚合。
注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据表1的标准条件调节促凝剂的加入量。浓缩胶25℃条件下,约40分钟可以聚合。
三. 电泳:
3.1 变性电泳:
3.1.1 10×Tris-Tricine-
SDS缓冲液配制:
将10×Tris-Tricine -SDS缓冲液(10×TTS)粉末(Cat No:CB010P)置于一干净的烧杯中,加入500 ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500ml 10×TTS缓冲液。超纯水稀释10倍配成1×Tris-Tricine
-SDS缓冲液。
注:伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用300-350 ml 1×TTS缓冲液。
3.1.2 样品处理:
待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液(变性,还原)[Cat No:TP050]等体积混合,95℃处理5分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液,根据说明书上样(预染Marker不能加热处理,非预染Marker上样前一般要75℃处理5-10分钟)。
3.2 非变性电泳:
3.2.1 10×Tris-Tricine缓冲液配制:
将10×Tris-Tricine缓冲液(10×TT)粉末[Cat No:CB020P](试剂盒不提供)置于一干净的烧杯中,加入500 ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500 ml 10×TT缓冲液。超纯水稀释10倍配成1×Tris-Tricine缓冲液。
注:伯乐Mini
III电泳槽一次电泳使用300-350 ml 1×TT缓冲液。
3.2.2 样品处理:
待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液(非变性,非还原)[Cat No:TP070]
(试剂盒不提供)等体积混合,不要加热,直接上样。
3.3 电泳:
将电泳槽的内槽加满电泳缓冲液,轻柔拔出梳子,用1ml移液器将梳孔吹洗干净,将Marker或蛋白样品加入点样孔,稳压电泳(表2),至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。
表2 多肽电泳条件
恒电压
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150V
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起始电流
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60-75mA/板胶
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结束电流
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15-25mA/板胶
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电泳时间
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2.5-3小时
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实验示例: