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Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒

Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒

产品编号:RTD6122

产品规格:25次

数量
价格 ¥300

Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒                    说明书Ver 740468

 

货号

名称

规格

RTD6122

Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒

25

 

产品组成:

序号

组分货号

名称

规格

贮存

1

RTD6122-01

2×浓缩胶缓冲液

20 ml

4

2

RTD6122-02

2×分离胶缓冲液

65 ml

4

3

RTD6122-03

2×浓缩胶聚合溶液

20 ml

4

4

RTD6122-04

2×分离胶聚合溶液

65 ml

4

5

AS020P

改良型促凝剂

5 ml(干粉)

常温

配制后-20

7

CB010P

10×Tris-Tricine- SDS缓冲液

500 ml(干粉)

常温

配制后4

8

TP050-01

2×Tricine上样缓冲液(变性,还原)

1 ml

-20

产品简介:

该产品含有多肽电泳全套试剂,可以用来检测1-20 kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少25块常规大小(8×10cm),厚度1 mm的PAGE胶。该产品具有以下特点:

1 适用范围广:制胶缓冲溶液中不含有SDS,适用于多肽的变性和非变性电泳。

2 分辨率高:凝胶缓冲液独特配方,可以有效分离1-5 kD多肽。

3 使用方便:配制凝胶时只需1:1混合浓缩胶或分离胶溶液,不用计算;红色浓缩胶,易于观察加样孔,上样方便。

4 绿色环保:不用单独添加有刺激性气味的催化剂如TEMED。

贮存、运输及效期:

按照标签温度贮存;常温运输;有效期一年。

使用说明:

. 凝胶促凝剂配制:

改良型凝胶促凝剂为固体粉末,使用前加入5 ml双蒸水溶解即配制成10% 凝胶促凝剂溶液,将溶液分装后置于-20℃保存,通常一年内有效。该溶液在4℃条件下可以稳定保存两周。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20℃保存的10% 凝胶促凝剂溶液。

. 制胶:

1. 配制分离胶:

1.1按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。                    1 (一块1 mm mini胶用量)*

 

分离胶

浓缩胶

 

18T /5 ml

4T /1.5 ml

浓缩胶缓冲液

/

0.75 ml

分离胶缓冲液

2.5 ml

/

浓缩胶用聚合溶液

/

0.75 ml

分离胶用聚合溶液

2.5 ml

/

10%凝胶促凝剂溶液

~50 μl

~15 μl

注: * 如非必须,不要使用厚度1.5 mm的凝胶,尽量使用厚度0.75 mm和1 mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。

1.2 在玻璃板中迅速灌入适量分离胶溶液,使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可。注:此溶液为过量,请勿全部注入。

1.3 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-2 cm的无水乙醇层,使凝胶表面保持平整。

1.4 静置10-20分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据表1的标准条件调节促凝剂的加入量。分离胶25℃条件下,约20分钟可以聚合。

2. 配制浓缩胶:

去除覆盖在分离胶上的乙醇层,用滤纸将残留的乙醇吸去。

2.1 按照表一将不同成分加入到小烧杯中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

2.2 将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

2.3 静置30-40分钟待凝胶聚合。

注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据表1的标准条件调节促凝剂的加入量。浓缩胶25℃条件下,约40分钟可以聚合。

. 电泳:

3.1 变性电泳:

3.1.1 10×Tris-Tricine- SDS缓冲液配制:

将10×Tris-Tricine -SDS缓冲液(10×TTS)粉末(Cat No:CB010P)置于一干净的烧杯中,加入500 ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500ml 10×TTS缓冲液。超纯水稀释10倍配成1×Tris-Tricine -SDS缓冲液。

注:伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用300-350 ml 1×TTS缓冲液。

3.1.2 样品处理:

        待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液(变性,还原)[Cat No:TP050]等体积混合,95处理5分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液,根据说明书上样(预染Marker不能加热处理,非预染Marker上样前一般要75处理5-10分钟)。

3.2 变性电泳:

3.2.1 10×Tris-Tricine缓冲液配制:

将10×Tris-Tricine缓冲液(10×TT)粉末[Cat No:CB020P](试剂盒不提供)置于一干净的烧杯中,加入500 ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500 ml 10×TT缓冲液。超纯水稀释10倍配成1×Tris-Tricine缓冲液。

注:伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用300-350 ml 1×TT缓冲液。

3.2.2 样品处理:

      待上样的检测样品与2×Tricine上样缓冲液(非变性,非还原)[Cat No:TP070] (试剂盒不提供)等体积混合,不要加热,直接上样。

3.3 电泳:

将电泳槽的内槽加满电泳缓冲液,轻柔拔出梳子,用1ml移液器将梳孔吹洗干净,将Marker或蛋白样品加入点样孔,稳压电泳(表2),至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

2 多肽电泳条件

恒电压

150V

起始电流

60-75mA/板胶

结束电流

15-25mA/板胶

电泳时间

2.5-3小时

 实验示例:


 
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