SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒（货号:RTD6116）
● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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保存条件
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AC2914-02
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40%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TS050-01
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4×Tris/SDS分离胶缓冲液 pH8.8
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100 ml
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4℃
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TS030-01
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4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液 pH6.8
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50 ml
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4℃
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AP020P
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APS（干粉）
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0.5 g
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RT
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TA0761-01
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TEMED
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0.5ml
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4℃，避光
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PL080
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5×MonoColor蛋白上样缓冲液（含还原剂）
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1 ml
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-20℃
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TG120P
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5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（干粉）
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1 L
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RT
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说明书
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一份
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● 产品简介：
本公司提供的SDS-PAGE蛋白电泳试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂。本试剂盒可配制至少50块常规大小的PAGE胶。
● 使用说明：
一 配制分离胶（各试剂使用量请参考表二）
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一），再按照下面的分离胶配方表（表二）配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)。
表一 不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
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SDS-PAGE分离胶浓度
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最佳分离范围
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6%
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50-150kD
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8%
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30-90kD
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10%
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20-80kD
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12%
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12-60kD
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15%
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10-40kD
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配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10%APS。
制备分离胶步骤：
1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2．按照表二将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5
cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合
表二 SDS-PAGE分离胶配方表
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组份
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不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml）
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6％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
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H2O
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3
|
6
|
9
|
12
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4×Tris/SDS分离胶buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
0.75
|
1.5
|
2.25
|
3
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
8％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
2.7
|
5.4
|
8.1
|
10.8
|
|
4×Tris/SDS分离胶buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
10％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
2.45
|
4.9
|
7.35
|
9.8
|
|
4×Tris/SDS分离胶buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
12％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
2.2
|
4.4
|
6.6
|
8.8
|
|
4×Tris/SDS分离胶buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.5
|
3
|
4.5
|
6
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
15％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1.825
|
3.65
|
5.475
|
7.3
|
|
4×Tris/SDS分离胶buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.875
|
3.75
|
5.625
|
7.
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
二 浓缩胶制备：
1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．按照表三将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
表三 SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表
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组份
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不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml）
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2 ml
|
4 ml
|
5 ml
|
10 ml
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H2O
|
1.3
|
2.6
|
3.25
|
6.5
|
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4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8
|
0.5
|
1
|
1.25
|
2.5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
0.2
|
0.4
|
0.5
|
1
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.005
|
0.01
|
|
10％ APS
|
0.02
|
0.04
|
0.05
|
0.1
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三 电泳：
凝胶凝固好后，根据以下配方准备电泳缓冲液。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制-1 L：将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。
在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。
下一步实验。
引用RTD6116 SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒发表文章
1. [2015 IF=1.15] Metal-Chelate
Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer for Purification of
ε-Poly-L-Lysine.
Product: RTD61116
SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒
Author: Sipeng Li, Zhaoyang
Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao
Journal: Appl
Biochem Biotechnol. 183, 4, 1254-1264,2017
Institution：Department of Bioengineering, East China University
of Science and Technology
Paper link：https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-017-2495-3
2. [2013 IF=5.48] Rapid
Allergen Inactivation Using Atmospheric Pressure Cold Plasma.
Product: RTD61116
SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒
Author: Yan
Wu,Yongdong Liang,Kai Wei,Wei Li,Maosheng Yao,Jue Zhang
Journal: Environmental
Science & Technology 48 (5), 2901–2909，2014
Institution： Peking
University
Paper
link：https://www.pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/es5003988
3. [2013 IF=3.95] MS2
Virus Inactivation by Atmospheric Pressure Cold Plasma Using Different Gas
Carriers and Power Levels.
Product: RTD61116
SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒
Author: Yan
Wu1, Yongdong Liang2, Kai Wei, Wei Li, Maosheng Yao, Jue Zhang, Sergey A.
Grinshpun.
Journal: Appl.
Environ. Microbiol 2015 Feb;81(3):996-1002
Institution：Peking University
Paper
link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25416775/