8-18% RealPAGE Tricine预制胶（通用型 U型玻璃板）
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货号
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名称
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规格
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RTD6115-0818
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8-18% RealPAGE Tricine预制胶 通用型 U型玻璃板
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10板/盒
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● 产品简介：
RealPAGE Tricine预制胶可以用来检测2.5-40 kD的多肽大小。预制胶玻璃板尺寸10×8.2 cm，凝胶尺寸8.3×7.5 cm，凝胶厚度1.1
mm，梳子12齿，最大上样体积30 μl，兼容伯乐电泳槽。
● 贮存、运输和效期：
4-8度贮存（切勿冷冻）；常温运输；有效期1个月。
● 使用说明：
一. 电泳缓冲液配制：
10×Tris-Tricine-SDS缓冲液配制：
将10×Tris-Tricine-SDS缓冲液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一干净的一升烧杯中，加入500ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500 ml 10×TTS缓冲液。
1×TTS缓冲液配制
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1×TTS配制量 500 ml
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1×TTS配制量 1000 ml
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10×TTS
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50
ml
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100
ml
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超纯水
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450
ml
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900
ml
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注：伯乐Mini
III电泳槽一次电泳使用500 ml 1×TTS缓冲液。
二. 样品处理：
待上样的检测样品与2×Tricine多肽上样缓冲液[Cat：TP050]等体积混合，95℃处理5分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液，根据说明书上样（预染Marker不能加热处理，非预染Marker上样前一般要95℃处理5分钟）。
三. 电泳：
3.1 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。
注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN
Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（左图）。六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。不兼容Thermol系列电泳槽。
3.2 将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品（已经过处理）加入点样孔，稳压电泳（表1），至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。
表1 多肽电泳条件
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恒电压
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120V
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起始电流
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80-85
mA/板胶
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结束电流
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25-35
mA/板胶
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电泳时间
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~70min
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四.染色：（使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202）
4. 1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），蛋白条带含量高于1μg的，染色1-2分钟即可见。
4.2
摇床上常温摇动10-15分钟，至条带清晰可见满足实验要求后停止染色。
4.3 蒸馏水漂洗凝胶，在蒸馏水中脱色摇动10-15分钟，至凝胶基本无蓝色背景，拍照记录结果。
五. 转膜：
多肽转膜选择孔径0.22 μm PVDF膜（用前用甲醇处理润湿）或0.22 μm NC膜。
5.1 半干转：
使用伯乐Trans-Blot Turbo半干转机器请选择配套的5×RealBlot快速半干转转膜缓冲液（货号：RT5030）。转膜推荐条件：一板小型凝胶（8×10 cm）恒流，1.3 A，7-10
min。
5.2 湿转：
湿转转膜缓冲液：25 mM
Tris,192 mM Glycine, 20% Methanol,pH~8.3；
转膜条件：恒流200-300
mA 40-60 min